Chlorophylle
Filtre
Les membranes en polymères à 0,45 µm de porosité, en particulier en esters de cellulose, ont souvent été préférées aux filtres en fibre de verre (type Whatman GF/C) car ces derniers étaient suspectés de laisser passer de fines particules contenant de la chlorophylle.
Les pores des filtres doivent être suffisamment petits pour retenir au mieux le picoplancton (0,2-2 µm), notamment en eaux océaniques. Une comparaison de filtres a conclu que le filtre Whatman GF/F (fibre de verre ; 0,7 µm de dimension nominale de pore) donne des mesures de chlorophylle a identiques à celles obtenues avec les membranes Millipore (acétate de cellulose ; 0,45 µm).
Les filtres GF/F retiennent plus de 94 % de la chlorophylle a d’origine picoplanctonique. En outre, ils sont inertes vis-à-vis des solvants d’extraction et les fibres sont supposées améliorer la dilacération mécanique des cellules. Les filtres GF/F ou équivalents sont donc recommandés pour la mesure de la chlorophylle a par les méthodes spectroscopiques.
Utilisation du carbonate de magnésium
Le carbonate de magnésium a été utilisé à la fois pour améliorer la rétention sur les filtres et pour prévenir toute acidification, avant et pendant l’extraction, source de dégradation de la chlorophylle a en phéopigments.
Des essais comparatifs de mesures de la chlorophylle a et des phéopigments sur des échantillons marins, avec ou sans MgCO3, n’ont pas montré de différences notables. Le document SCOR-UNESCO (1966) le recommandait, mais il est désormais déconseillé car il a été montré qu’il adsorbe certains pigments.
Filtration
L’activité biologique et la photosynthèse se poursuivent dans l’échantillon après le prélèvement : elles peuvent être réduites en plaçant l’échantillon au frais et à l’abri de la lumière. Mais, par précaution, même en plaçant les échantillons au réfrigérateur, il est recommandé de ne pas différer la filtration de plus de quelques heures (10 au maximum).
Le volume à filtrer est dépendant de la zone étudiée, de la saison, de la technique analytique utilisée (spectrophotométrie ou fluorimétrie). Pour que l’extraction soit complète, la quantité de chlorophylle a déposée sur le filtre ne doit pas excéder environ 10 µg.
Veiller à ne pas travailler en lumière intense mais de préférence dans la pénombre.
Appliquer le vide et, à l’aide de la pince, placer une membrane sur le dispositif de filtration. Homogénéiser doucement l’échantillon et, si la totalité du flacon d’échantillonnage n’est pas filtrée, mesurer le volume à filtrer.
Verser l’échantillon dans le dispositif de filtration et s’assurer que la dépression n’est pas excessive (0,2 bar). Si l’on craint de ne pouvoir filtrer tout le volume mesuré (durée excessive, colmatage), le transvaser dans le dispositif de filtration par fractions en ré-homogénéisant le volume restant avant chaque transvasement. Ne pas laisser le filtre venir à sec entre les ajouts.
Juste avant que le filtre ne vienne à sec, rincer les parois du dispositif de filtration avec un peu d’eau de mer filtrée. Après assèchement du filtre, laisser fluer l’air quelques instants pour éliminer l’eau du filtre. Si l’échantillon n’a pas été pré-filtré, éliminer à la pince, si nécessaire, le zooplancton visible à l’œil nu sur les filtres.
Tout en maintenant le vide, plier le filtre à l’aide de pinces, face chargée à l’intérieur. Introduire le filtre dans le tube prévu à cet usage (type «hémolyse»).
Conservation des filtres
La température et le temps de conservation sont des points critiques pour la chlorophylle. La conservation à température ambiante, même après lyophilisation, n’est pas recommandée (dégradation poussée des pigments).
La Monographie UNESCO (Jeffrey et al., 1997) décrit des expériences de conservation vers -18 à -20°C qui ont un taux de récupération d’environ 100% après un mois de conservation. D’autres auteurs ont des pertes inférieures à 5-10% après une conservation de 8 semaines (Mantoura et al., 1997b).
Si les filtres pour la mesure de la chlorophylle a et des phéopigments doivent être conservés plusieurs semaines, il est recommandé de les congeler vers -25°C. Pour une durée plus longue (max : 1 an), les congeler dans de l’azote liquide.